ABSTRACT
Introducción: el toxoide pertúsico es una proteína muy utilizada en las vacunas acelulares contra la tosferina. Desarrollar un protocolo para su purificación con pocos pasos y con parámetros de purificación adecuados, es muy importante para su caracterización química y la valoración de los efectos adversos que puede provocar al inocular principalmente a ratones. Los protocolos de purificación descritos en la literatura científica involucran varios pasos de purificación y bajos rendimientos. Objetivo: desarrollar un protocolo de purificación del toxoide pertúsico que garantice un grado de pureza alto y un rendimiento de más de 80% a partir de cultivos de un mutante de B. pertussis obtenido en el Centro Nacional de Investigaciones Científicas (CNIC). Métodos: para purificar el toxoide se usó una columna de intercambio catiónico Fractogel EMD SO-3 y se eluyó incrementando el pH y la concentración salina por pasos hasta obtener los resultados esperados. La determinación de proteínas totales se realizó mediante el micrométodo linealizado de Bradfor10 usando como patrón albúmina de suero bovina (BSA). Resultados: se obtuvo 3,28 mg de toxoide por cada litro de cultivo con un rendimiento de 86,7% y un grado de pureza de 96,7%. Conclusiones: el procedimiento de purificación descrito permite obtener el toxoide pertúsico con un rendimiento mayor que el 80% y alto grado de pureza, lo que garantiza la calidad requerida para su caracterización bioquímica e inmunológica.
Introduction: pertussis toxoid is a widely used in acellular vaccines against pertussis protein. Develop a protocol for purification with few steps and with parameters suitable purification is very important for chemical characterization and assessment of adverse effects that can lead to inoculate mainly mice. Purification protocols described in scientific literature involve several purification steps and low yields. Objective: to develop a protocol for purification of pertussis toxoid to ensure a high degree of purity and a yield of over 80% from cultures of a mutant of B. pertussis obtained at the National Center for Scientific Research (CNIC). Methods: for purifying the toxoid cation a Fractogel EMD SO-3 cationic interchange column was used by increasing the pH and salt concentration to obtain the expected results. The total protein determination was performed using linearized macromethod of Bradfor10 using as bovine serum albumin standard (BSA). Results: 3.28 mg toxoid was obtained per liter of culture with a yield higher than 86.7% and a purity of 96.7%. Conclusions: the purification process described allows for the pertussis toxoid with a higher yield than 80% and high purity, ensuring the quality required for biochemical and immunological characterization.